HE染色法是組(zǔ)織學
，胚胎學
，病理學教(jiào)學(xué)與科(kē)研(yán)中(zhōng)最(zuì)基(jī)本
，使用(yòng)最(zuì)廣泛的技(jì)術方法(fǎ)。一張(zhāng)質(zhì)量(liáng)上乘的HE切(qiē)片(piàn)是(shì)病(bìng)理醫生(shēng)得以做(zuò)出(chū)正(zhèng)確(què)診(zhěn)斷的(dí)關鍵。影響(xiǎng)HE染色(sè)質量的因(yīn)素(sù)是多(duō)方麵的。本文(wén)主(zhǔ)要對HE染(rǎn)色中常見(jiàn)的(dí)幾(jī)個問(wèn)題及其(qí)對策進行(háng)分(fēn)析討論。


      蘇木(mù)精——伊紅染(rǎn)色法(fǎ) ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡稱(chēng)HE染(rǎn)色法 ，石(shí)蠟切片技術裏常(cháng)用的染色法之(zhī)一 。蘇木精染液為(wéi)鹼(jiǎn)性(xìng) ，主要(yào)使細(xì)胞核(hé)內的染色(sè)質與(yǔ)胞質(zhì)內的(dí)核酸著紫藍色(sè) ；伊紅(hóng)為酸性(xìng)染(rǎn)料(liào) ，主(zhǔ)要使細(xì)胞質和細胞(bāo)外基質中(zhōng)的成(chéng)分著(zhuó)紅(hóng)色 。

HE染色常(cháng)見的(dí)問(wèn)題及解決方(fāng)法(fǎ)

問(wèn)題1  切片呈霧(wù)狀/發(fā)灰/發(fā)白(bái)，核(hé)染(rǎn)色模糊

原因：①待封(fēng)還潮(cháo)；②蘇(sū)木素過氧化(huà)老化(huà)，冰醋(cù)酸揮發(fā)；③脫水，透明(míng)劑不(bù)良，雜(zá)質(zhì)過多(duō)；

解決方(fāng)法：①空氣除濕；②蘇(sū)木素(sù)過濾後加(jiā)入冰醋(cù)酸（促(cù)染劑）；③常規(guī)更換酒(jiǔ)精(jīng)，二(èr)甲(jiǎ)苯。


問題2  染色(sè)不均

原(yuán)因(yīn)：①固(gù)定不充(chōng)分(fēn)；②高濃度酒精脫水時間過長；③浸(jìn)蠟(là)不(bù)佳(jiā)；④染色時(shí)間掌握(wò)不好；

解決方(fāng)法(fǎ)：①定期(qī)更換(huàn)染色(sè)液(yè)；②用2%鐵明礬處理；③浸(jìn)蠟溫(wēn)度高(gāo)於熔點2℃左右(yòu)；④蘇木素(sù)染(rǎn)色鏡(jìng)下(xià)控(kòng)製。

問題3  細胞成分藍色，如粘液(yè)，膠原蛋白(bái)或平滑肌(jī)

原因：①蘇(sū)木(mù)素(sù)溶液過(guò)染(rǎn)；②分(fēn)化(huà)不充分；③蘇木素溶(róng)液(yè)的PH值＞3；

解(jiě)決方法：①縮(suō)短(duǎn)染色時間；②用1%鹽酸(suān)酒(jiǔ)精分(fēn)化2-5s，洗脫過(guò)染(rǎn)胞核，不應著(zhuó)色的組織成分；③用乙酸調(tiáo)節蘇(sū)木素PH值(zhí)為2.5；④提(tí)高酸性(xìng)酒(jiǔ)精的(dí)濃(nóng)度。

問題4  細(xì)胞(bāo)核染色太淺
原因(yīn)：①蘇木素溶液過老(lǎo)化(huà)；②分(fēn)化時間過長(cháng)；③蘇(sū)木(mù)素(sù)溶(róng)液(yè)染色時(shí)間短；④固定處理不良，組(zǔ)織不易(yì)染色；解(jiě)決方法(fǎ)：①過(guò)濾(lǜ)後100ml蘇木素(sù)+1ml冰(bīng)醋酸(suān)，或更換新(xīn)鮮(xiān)蘇(sū)木素溶液(yè)；②減少分(fēn)化時間或(huò)稀(xī)釋(shì)分(fēn)化(huà)液；③延長蘇木(mù)素(sù)染(rǎn)色時間；④高濃(nóng)度酒精(jīng)固定(dìng)時間(jiān)過(guò)長(cháng)，染(rǎn)不上色(sè)，用2%鐵明(míng)礬(fán)處(chǔ)理(lǐ)。
 問題5  胞質染(rǎn)色(sè)太深

原(yuán)因：①切片在(zài)伊紅溶液中(zhōng)時間(jiān)過長(cháng)；②伊紅(hóng)染(rǎn)色(sè)後分(fēn)化(huà)不足(zú)；③伊紅染(rǎn)液可能過濃；

解(jiě)決方(fāng)法：①減(jiǎn)少伊(yī)紅(hóng)溶(róng)液染(rǎn)色時(shí)間，稀(xī)釋伊(yī)紅(hóng)染液；②85%酒精增(zēng)加(jiā)分化時間(jiān)。

問(wèn)題6  胞質(zhì)染色(sè)太(tài)淡(dàn)

原因(yīn)：①伊紅(hóng)染液使用時間(jiān)太久(jiǔ)；②伊紅(hóng)染液的(dí)PH值(zhí)＞4.5，乙(yǐ)醇(chún)脫水(shuǐ)易(yì)褪色(sè)；③伊紅(hóng)染液後酒(jiǔ)精衝(chōng)洗(xǐ)不(bù)正(zhèng)確(què)；④伊紅染(rǎn)色時間太(tài)短；

解(jiě)決方法：①更換(huàn)新鮮的(dí)伊(yī)紅(hóng)染液(yè)；②用濃醋酸調(tiáo)節伊紅(hóng)染液(yè)PH值（4~4.5），伊紅(hóng)PH值＜3.6，核發(fā)紫(zǐ)，對比不(bù)強(qiáng)；伊紅染(rǎn)液(yè)PH值(zhí)＞5，染不(bù)上；③減少伊(yī)紅(hóng)步驟(zhòu)後(hòu)酒精(jīng)衝(chōng)洗的(dí)時間；④增(zēng)加伊紅溶液(yè)的染(rǎn)色時(shí)間。

問(wèn)題(tí)7  細胞(bāo)核(hé)發紅棕(zōng)色

原(yuán)因：①蘇(sū)木素染色(sè)液(yè)氧化過度(dù)；②返(fǎn)藍不足；

解(jiě)決方法：①及時更換然(rán)染(rǎn)液；②返(fǎn)藍可用流水(shuǐ)
，溫(wēn)水(shuǐ)或稀氨(ān)水
，0.2%碳(tàn)酸(suān)氫鈉等(děng)。