1.如何保存和分(fēn)裝(zhuāng)抗(kàng)體(tǐ)？

      對(duì)於(yú)許多(duō)抗(kàng)體而言，分裝為(wéi)小(xiǎo)等(děng)份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下(xià)凍存是最佳的保存條件。抗體保存應避免反復(fù)凍融(róng)，分(fēn)裝可(kě)以最大(dà)限度減少凍(dòng)融對抗體造成(chéng)的(dí)損壞，還可(kě)避免(miǎn)多次(cì)從同(tóng)一管中(zhōng)移(yí)取抗體而引入(rù)汙(wū)染(rǎn)。但(dàn)是每份不應(yīng)該少於(yú)10 uL。分裝的(dí)體(tǐ)積(jī)越小，抗體(tǐ)的濃度受蒸發(fā)和管(guǎn)壁吸(xī)附(fù)的影(yǐng)響就會(huì)越大。大部(bù)分情況下，抗體在 4 ℃條件下(xià)能夠保存1-2周。但(dàn)有(yǒu)部分特例。為了防止微(wēi)生(shēng)物(wù)汙染，可(kě)在抗體(tǐ)中(zhōng)加入(rù)適當濃(nóng)度的(dí)疊氮(dàn)化(huà)鈉(nà)。如(rú)果(guǒ)要用抗體對活(huó)細(xì)胞進行染(rǎn)色(sè)或處理(lǐ)，或(huò)者(zhě)要(yào)用抗體進行體內研究(jiū)，則不能(néng)使(shǐ)用含疊氮(dàn)化鈉的抗體製(zhì)備(bèi)物(wù)；這種抗(kàng)菌(jūn)劑對大部(bù)分(fēn)生(shēng)物體都(dū)有毒害作(zuò)用(yòng)。
部(bù)分(fēn)加甘油的抗體(tǐ)，直接儲存(cún)在-20℃即可(kě)。
 
2.如何正確(què)選擇一抗？
      根據(jù)檢(jiǎn)測(cè)的種屬(shǔ)和(hé)實驗(yàn)方法(fǎ)尋找(zhǎo)相關一抗產(chǎn)品(pǐn)，樣品的(dí)性質決定(dìng)哪個(gè)抗體最(zuì)合適(shì)。需(xū)考慮以下(xià)方麵：
         (1) 檢測(cè)的(dí)蛋(dàn)白質(zhì)區(qū)域(yù)。有些(xiē)抗(kàng)體僅能識別(bié)已還原(yuán)和(hé)變(biàn)性的(dí)蛋白質(zhì)，因為這樣露出了蛋白質折(zhē)疊形成的二(èr)級和三級(jí)結構(gòu)中隱(yǐn)藏起(qǐ)來的表(biǎo)位。而有(yǒu)些(xiē)抗體
           僅能識別(bié)天然(rán)，折疊(dié)狀態的蛋(dàn)白(bái)質(zhì)上的表位。免(miǎn)疫組化(huà)中，有(yǒu)些(xiē)抗體僅適用於(yú)未固定(dìng)的冷凍組(zǔ)織，如果沒有抗原修復步驟(zhòu)逆轉福爾馬(mǎ)林固(gù)定所引(yǐn)起(qǐ)的(dí)
           交聯(lián)，那麼(mó)其(qí)它抗(kàng)體不能(néng)與福(fú)爾馬(mǎ)林(lín)固定(dìng)，石蠟(là)包埋的(dí)組織中的(dí)靶標結合。
         (2) 樣品處理(lǐ)方(fāng)式(shì)；有(yǒu)些抗(kàng)體要求(qiú)樣品用特定(dìng)方式(shì)處理(lǐ)。
         (3) 產生(shēng)一(yī)抗的生(shēng)物體應與樣品生(shēng)物(wù)體不(bù)同；這(zhè)是為了(liǎo)避(bì)免抗免(miǎn)疫(yì)球蛋(dàn)白(bái)的二抗(kàng)與樣品(pǐn)中的(dí)內源(yuán)性免(miǎn)疫球蛋(dàn)白間(jiān)發(fā)生交叉反應(yīng)。

3.如(rú)何正確(què)選擇二(èr)抗？
      二抗(kàng)是(shì)指專門和(hé)一抗進行特異性(xìng)反(fǎn)應(yīng)和(hé)結(jié)合的(dí)抗體，在免疫學(xué)反應中，經常(cháng)需要(yào)針對試(shì)驗選擇不同的二抗(kàng)。考(kǎo)慮(lǜ)以下(xià)方麵：
         (1) 針(zhēn)對一抗來源的(dí)二(èr)抗(kàng)；比(bǐ)如一抗是小(xiǎo)鼠(shǔ)來源(yuán)的，二抗就(jiù)要是(shì)抗(kàng)小鼠的。
         (2) 二抗(kàng)需與一(yī)抗(kàng)的類別(bié)或(huò)亞類(lèi)相匹配(pèi)；比(bǐ)如一(yī)抗(kàng)是IgM，二抗就要(yào)是(shì)抗(kàng)IgM的(dí)抗體(tǐ)。
         (3) 為了(liǎo)增加(jiā)特異性，降(jiàng)低(dī)背景：可(kě)以選(xuǎn)擇Fab段的抗體(tǐ)（去(qù)除Fc段(duàn)的(dí)），經過(guò)標(biāo)本(běn)來(lái)源(yuán)種屬血清(qīng)吸附(fù)的(dí)的二抗。
         (4) 查看二抗(kàng)的說明(míng)書，選擇(zé)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證(zhèng)可以(yǐ)用於(yú)相應實驗(yàn)方法的二抗(kàng)。
         (5) 可以通過一抗說明書(shū)頁麵的(dí)“Related Products”來選(xuǎn)擇合適(shì)的二(èr)抗。

4.二抗耦聯(lián)標(biāo)記
      標(biāo)記物與抗(kàng)體偶聯(lián)，以顯(xiǎn)示目標蛋(dàn)白(bái)的(dí)存(cún)在。標記物的選擇取(qǔ)決(jué)於(yú)實(shí)驗應用(yòng)。主要(yào)有：
         (1) 熒(yíng)光標記；熒光(guāng)標(biāo)記(jì)物在(zài)特(tè)定波(bō)長的光激(jī)發下發(fā)出可(kě)見(jiàn)範(fàn)圍內的光。有(yǒu)多種熒(yíng)光標記(jì)物可供(gōng)選擇(zé)，它們(mén)具(jù)有(yǒu)特(tè)有(yǒu)的激發和發(fā)射特性。
         (2) 酶標記(jì)；酶(méi)標(biāo)記物如(rú)辣根(gēn)過氧化(huà)物酶 (HRP) 和鹼(jiǎn)性(xìng)磷酸酶 (AP) 在與適當的(dí)底物(wù)混(hùn)合時形(xíng)成(chéng)有色沉澱。
         (3) 生(shēng)物素(sù)標(biāo)記(jì)；生物(wù)素化(huà)的抗體(tǐ)可用於(yú)放大(dà)信號，具體通過(guò)親和素(sù)-生物素-酶或熒光染料復(fù)合物或者親(qīn)和(hé)素或鏈(liàn)黴親(qīn)和素偶(ǒu)聯(lián)到(dào)酶或熒光染料實(shí)現。

5. 如何確(què)定(dìng)抗體(tǐ)的(dí)稀釋(shì)比例?
      如果(guǒ)說(shuō)明書中(zhōng)有(yǒu)推薦的(dí)稀釋比例(lì)，請(qǐng)按(àn)照(zhào)該稀釋比(bǐ)例(lì)進(jìn)行實驗(yàn)。但是由於標本(běn)類型，實驗條件，操作環(huán)境(jìng)等各(gè)種因素(sù)的(dí)影響(xiǎng)，推薦濃度僅作為參考(kǎo)。實驗者需要(yào)在推薦濃(nóng)度周(zhōu)圍進行多個(gè)濃度梯度(dù)的實驗(yàn)，從(cóng)中(zhōng)發現(xiàn)最(zuì)佳的稀釋(shì)比(bǐ)例(lì)。如果說明書沒有推(tuī)薦(jiàn)稀釋(shì)比(bǐ)例，僅(jǐn)注(zhù)明(míng)“Use at an assay dependent dilution”，就需要做大量(liáng)的(dí)預(yù)實(shí)驗來摸索最(zuì)佳的稀釋(shì)比(bǐ)例(lì)。