技術(shù)文獻
技(jì)術(shù)文獻
(一)靈(líng)敏(mǐn)度高
雖然(rán)酶活性調節ELISA方(fāng)法的靈(líng)敏(mǐn)度(dù)目前(qián)並不十(shí)分(fēn)理想,但(dàn)在酶活性放(fàng)大ELISA中,檢測(cè)的(dí)靈(líng)敏度遠比(bǐ)RIA高(gāo)。根(gēn)據質量(liáng)作(zuò)用(yòng)定律。即免(miǎn)疫(yì)反應所(suǒ)形(xíng)成的免(miǎn)疫(yì)復(fù)合(hé)物(wù)量(liáng)與(yǔ)反(fǎn)應物(wù)濃(nóng)度成正(zhèng)比(bǐ)。推測所檢(jiǎn)測的待(dài)測(cè)物分子數(shù)為(wéi)1。已知(zhī)1個摩爾濃度含6.02×1023個分子,那麼理論推測(cè)酶活性(xìng)放大Elisa方法(fǎ)的zui低檢測(cè)限(xiàn)可達1.7×10-24mol/L。雖然在(zài)實(shí)際應用中(zhōng)由於反應(yīng)條(tiáo)件和(hé)試劑純(chún)度以(yǐ)及儀器精度等因素(sù)的(dí)影響,往(wǎng)往(wǎng)達(dá)不到這(zhè)個水平(大(dà)於104個分子),但(dàn)表明Elisa在(zài)靈(líng)敏(mǐn)度(dù)方(fāng)麵(miàn)的改進潛(qián)力(lì)是很(hěn)大的。
(二)特(tè)異(yì)性強
從(cóng)免疫(yì)反應的(dí)角度(dù)來說(shuō),Elisa與(yǔ)RIA的(dí)特(tè)異性(xìng)應(yīng)該是。但(dàn)在ELISA方(fāng)法中(zhōng),由(yóu)於(yú)作用檢測指示(shì)劑的酶與(yǔ)其(qí)底(dǐ)物的反(fǎn)應(yīng)有(yǒu)專(zhuān)一性(xìng),從而增(zēng)加了(liǎo)該(gāi)方(fāng)法的特異性(xìng)。
(三)對儀器(qì)設(shè)備要(yào)求不(bù)高,測定成本(běn)低
Elisa測定(dìng)在(zài)普通實驗室便可進行,常用的(dí)儀器設備包括加(jiā)樣器(qì),培(péi)養箱(xiāng),酶標(biāo)專用讀(dú)數(shù)器等。按(àn)現有價格折(zhē)算(suàn),酶標(biāo)儀的(dí)價(jià)格(gé)隻及液(yè)閃(shǎn)儀的(dí)1/6至1/4,因此每測定(dìng)一(yī)個(gè)樣本所需成(chéng)本(běn)不(bù)及PIA的1/10至1/16。某些(xiē)定(dìng)性(xìng)Elisa方(fāng)法(fǎ),還可在野(yě)外進行(háng),操作十分(fēn)方便(biàn)。
(四(sì))方法快速(sù),簡便(biàn)
均質酶免疫(yì)測定(dìng)方法操(cāo)作時,所有反應試劑均在同(tóng)一(yī)體(tǐ)係內進行,不(bù)需任(rèn)何分(fēn)離步驟,操作十(shí)分簡便,快(kuài)速,數分鐘便(biàn)能(néng)得出結(jié)果。某些定性(xìng)Elisa試(shì)劑(jì)盒(hé),如(rú)國(guó)外(wài)生產的(dí)某些奶牛(niú)發情鑒定和妊(rèn)娠(shēn)診(zhěn)斷Elisa試(shì)劑(jì)盒,數分鐘時間便能完(wán)成(chéng)一次(cì)測定。
(五(wǔ))試劑保(bǎo)存時間(jiān)較長(cháng)
作為(wéi)檢測指(zhǐ)示劑用的酶和酶標(biāo)記物(wù),在(zài)低(dī)溫或(huò)幹燥(zào)條(tiáo)件下相對(duì)穩(wěn)定,可保存(cún)半(bàn)年至數年之(zhī)久。
(六)方法(fǎ)種(zhǒng)類(lèi)多(duō)
ELISA技術可(kě)以充分利(lì)用單(dān)克(kè)隆抗(kàng)體的優點,並(bìng)能利用某些(xiē)非(fēi)免(miǎn)疫(yì)反應試劑(如(rú)SPA,凝(níng)集(jí)素(sù)等(děng))的(dí)作用,發展成為(wéi)許多(duō)新(xīn)方(fāng)法。此外,發展Elisa技術還(huán)可以從酶及其底物(wù)兩方(fāng)麵著手。這是(shì)因(yīn)為(wéi):*,用(yòng)於(yú)ELISA技(jì)術的酶(méi)其種(zhǒng)類遠(yuǎn)遠(yuǎn)多於可(kě)用作(zuò)RIA檢(jiǎn)測指(zhǐ)示劑的(dí)放射性同(tóng)位(wèi)素(sù)。生(shēng)物界的(dí)酶多(duō)種多(duō)樣(yàng),有(yǒu)希望(wàng)開發(fā)很多類型(xíng)的酶用(yòng)於(yú)Elisa,並建立(lì)相(xiāng)應的(dí)ELISA方法。相(xiāng)反(fǎn),自然界(jiè)的化學元(yuán)素是有限的,放(fàng)射(shè)性(xìng)同(tóng)位素(sù)的種(zhǒng)類(lèi)更(gēng)加(jiā)有限。*,由(yóu)於(yú)酶(méi)的多樣性(xìng),酶(méi)作用底(dǐ)物也(yě)有(yǒu)多(duō)種(zhǒng)多樣(yàng),與此相對(duì)應(yīng)的(dí)生色(sè)源或供氫體的(dí)種類也(yě)有(yǒu)遠(yuǎn)大的開(kāi)發和發展潛力(lì)。
Elisa由於不存在放射(shè)性(xìng)同位(wèi)素(sù)汙染,因此,除加(jiā)待(dài)測樣(yàng)本需要人(rén)工操(cāo)作外(wài),其(qí)他各步驟均(jūn)可(kě)用儀器(qì)自動(dòng)化(huà)完(wán)成。在(zài)這(zhè)種自(zì)動(dòng)化條(tiáo)件下,平(píng)均每人每(měi)天(tiān)可完(wán)成2000餘(yú)個樣本(běn)的(dí)檢(jiǎn)測工作。
