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技術文獻(xiàn)

鯨孕激素/孕(yùn)酮(tóng)(PROG)ELISA檢測試(shì)劑盒說明書

文字(zì):[大][中][小] 2022-6-24    瀏(liú)覽次(cì)數:928    
鯨(jīng)孕激(jī)素/孕酮(PROG)ELISA檢測試劑盒(hé)說明書(shū)

產品(pǐn)名(míng)稱(chēng): 鯨(jīng)孕激素(sù)/孕(yùn)酮(tóng)(PROG)ELISA檢測試劑(jì)盒
規(guī)格:96T/48T 
保存(cún);2-8℃。
檢測目(mù)的(dí):用(yòng)於(yú)檢(jiǎn)測血(xiě)漿(jiāng),血(xiě)清及相(xiāng)關液(yè)體(tǐ)等(děng)樣本。例如(rú)灌洗(xǐ)液,腦(nǎo)脊(jǐ)液,血(xiě)清,血漿,尿液,胸腹(fù)水,細(xì)胞培(péi)養上(shàng)清,組織(zhī)匀漿(jiāng)等(děng)標(biāo)本(běn).
檢(jiǎn)測種屬(shǔ):大(dà)鼠(shǔ),小(xiǎo)鼠(shǔ),豚(tún)鼠(shǔ),倉鼠,裸(luǒ)鼠(shǔ),兔(tù)子,豬,犬,猴(hóu),馬,牛(niú),馬(mǎ)鈴薯,鹿,羊,雞(jī),鴨,魚(yú),人(rén),等動植物。

試(shì)劑盒組成及試劑配製 :
1.酶(méi)聯(lián)板(bǎn)(Assay plate ):一(yī)塊(96孔)。 
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)(Standard):2瓶(凍幹品(pǐn))。
3. 樣(yàng)品(pǐn)稀(xī)釋液(yè)(Sample Diluent):1×20ml/瓶(píng)
4. 生物素(sù)標記抗(kàng)體(tǐ)稀(xī)釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根過(guò)氧化物酶標記(jì)親和(hé)素稀釋(shì)液(yè) (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶(píng)。
6. 生物素(sù)標記抗(kàng)體(tǐ)(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根(gēn)過(guò)氧(yǎng)化物(wù)酶(méi)標記親(qīn)和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(píng)(1:100)
8. 底物(wù)溶(róng)液(yè)(TMB Substrate):1×10ml/瓶(píng)。 
9. 濃(nóng)洗滌液(yè)(Wash Buffer):1×20ml/瓶(píng),使用(yòng)時每(měi)瓶用(yòng)蒸(zhēng)餾水稀(xī)釋25倍。 
10. 終(zhōng)止液(yè)(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
樣品收(shōu)集,處理及保存(cún)方(fāng)法:
1)血清-----操作(zuò)過程中(zhōng)避免任何細胞刺(cì)激。使(shǐ)用不含(hán)熱原和內毒素的試管。收集血(xiě)液後(hòu),1000×g離(lí)心10分鐘將(jiāng)血清(qīng)和紅(hóng)細胞迅(xùn)速小心地(dì)分(fēn)離。
2)血(xiě)漿-----EDTA,檸檬酸鹽(yán),肝(gān)素血漿可用於(yú)檢(jiǎn)測。1000×g離心(xīn)30分(fēn)鐘(zhōng)去(qù)除(chú)顆(kē)粒。
3)細胞(bāo)上清(qīng)液(yè)---1000×g離(lí)心10分鐘去(qù)除顆(kē)粒和聚合物(wù)。
4)組(zǔ)織匀(yún)漿-----將(jiāng)組織(zhī)加入(rù)適(shì)量(liáng)生理(lǐ)鹽水搗碎。1000×g離心(xīn)10分(fēn)鐘(zhōng),取(qǔ)上(shàng)清(qīng)液
5)保(bǎo)存(cún)------如(rú)果樣(yàng)品(pǐn)不立即使用,應(yīng)將(jiāng)其(qí)分(fēn)成小部分-70 ℃保(bǎo)存,避(bì)免反(fǎn)復冷(lěng)凍。盡可(kě)能(néng)的(dí)不(bù)要(yào)使用(yòng)溶(róng)血(xiě)或血。如(rú)果(guǒ)血清中大(dà)量(liáng)顆粒(lì),檢測前先(xiān)離(lí)心或過濾。不(bù)要在37℃或(huò)更高的(dí)溫(wēn)度加(jiā)熱(rè)解凍。應在室溫下解凍(dòng)並確保樣品均匀(yún)地充(chōng)分(fēn)解(jiě)凍。

操作步驟:
1. 標準品的稀釋:本試(shì)劑盒(hé)提(tí)供(gōng)原(yuán)倍(bèi)標(biāo)準(zhǔn)品一支(zhī),用(yòng)戶(hù)可按(àn)照下列(liè)圖(tú)表(biǎo)在小試管中(zhōng)進行(háng)稀釋(shì)。
2. 加樣:分(fēn)別(bié)設空白孔(空(kōng)白(bái)對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑(jì),其(qí)餘(yú)各(gè)步操(cāo)作相(xiāng)同(tóng)),標(biāo)準孔,待測樣品孔。在酶(méi)標(biāo)包被板上(shàng)標(biāo)準(zhǔn)品準確加樣(yàng) 50μl,待(dài)測(cè)樣(yàng)品(pǐn)孔(kǒng)中先加樣品(pǐn)稀釋液 40μl,然後(hòu)再加(jiā)待(dài)測樣品 10μl(樣品終(zhōng)稀釋(shì)度為 5 倍)。加樣(yàng)將樣(yàng)品加(jiā)於(yú)酶(méi)標板孔(kǒng)底部,盡(jìn)量不(bù)觸及孔壁,輕輕晃(huǎng)動混匀。
3. 溫(wēn)育(yù):用封板膜(mó)封板後置(zhì) 37℃溫育 30 分(fēn)鐘(zhōng)。
4. 配(pèi)液:將 30 倍(bèi)濃縮洗滌(dí)液用蒸餾(liù)水 30 倍稀(xī)釋(shì)後(hòu)備(bèi)用
5. 洗(xǐ)滌:小心揭掉封板膜(mó),棄去(qù)液(yè)體(tǐ),甩(shuǎi)幹,每孔(kǒng)加滿(mǎn)洗滌液,靜(jìng)置(zhì) 30 秒後棄(qì)去,如(rú)此重(zhòng)復 5 次,拍幹。
6. 加酶:每孔(kǒng)加(jiā)入酶(méi)標試劑 50μl,空(kōng)白孔(kǒng)除外。
7. 溫(wēn)育(yù):操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯(xiǎn)色:每孔(kǒng)先(xiān)加(jiā)入(rù)顯色劑(jì) A50μl,再加入(rù)顯(xiǎn)色劑 B50μl,輕(qīng)輕震(zhèn)蕩混匀,37℃避光(guāng)顯(xiǎn)色15 分鐘.
10. 終(zhōng)止(zhǐ):每孔(kǒng)加終止(zhǐ)液 50μl,終止反(fǎn)應(此(cǐ)時(shí)藍色(sè)立轉黃色(sè))。
11. 測定:以(yǐ)空(kōng)白(bái)空(kōng)調零(líng),450nm 波長(cháng)依序測(cè)量各孔(kǒng)的(dí)吸光度(dù)(OD 值)。 測定應在加終止(zhǐ)液(yè)後 15 分(fēn)鐘(zhōng)以(yǐ)內進行。
使(shǐ)用注意(yì)事項:
1. 試(shì)劑(jì)盒使用前請(qǐng)保(bǎo)存在2-8℃。復溶後(hòu)的標準品若未用完,請廢(fèi)棄(qì)。
2. 微(wēi)量試(shì)劑(jì)運輸(shū)中顛簸和可能(néng)的倒置,會(huì)使液體(tǐ)沾(zhān)到(dào)管壁(bì)或(huò)瓶蓋(gài)。因此使用(yòng)前(qián)請(qǐng)1000轉/分離心(xīn)1分鐘,以(yǐ)使(shǐ)附著(zhuó)管壁或瓶蓋的液體(tǐ)沉(chén)積(jī)到管底。
3. 從(cóng)冰(bīng)箱(xiāng)中(zhōng)取出的(dí)濃縮(suō)洗滌液(yè)可能(néng)有(yǒu)結(jié)晶(jīng),屬於(yú)正(zhèng)常現象,微(wēi)加(jiā)熱至(zhì)40℃使結(jié)晶(jīng)完全(quán)溶解後再(zài)配製洗滌(dí)液。
(加(jiā)熱(rè)溫度不(bù)要超過(guò)50℃)使(shǐ)用時洗滌(dí)液應為(wéi)室溫。
4. 不同批(pī)號的試劑盒組份避(bì)免混用(yòng)(洗滌(dí)液和反應終止(zhǐ)液除(chú)外(wài))。
5. 充(chōng)分輕微(wēi)混匀(yún)對(duì)反應(yīng)結(jié)果尤(yóu)為重要,zui好使(shǐ)用(yòng)微量振蕩器(使用zui低(dī)頻率),如無微(wēi)量(liáng)振蕩器,可(kě)在(zài)反應(yīng)孵(fū)育前(qián)手工(gōng)輕(qīng)輕混匀(yún)。
6. 在試(shì)驗中標(biāo)準(zhǔn)品和(hé)樣(yàng)本(běn)檢(jiǎn)測時(shí)建議作(zuò)雙(shuāng)孔(kǒng)檢測(cè)。
7. 試(shì)驗中所(suǒ)用的(dí)試管和吸(xī)頭(tóu)均(jūn)為一次性使用,嚴(yán)禁在(zài)不同的(dí)液(yè)體之間(jiān)混用(yòng)!否則(zé)將(jiāng)影(yǐng)響試(shì)驗(yàn)結果。
8. 試(shì)驗(yàn)中請穿著(zhuó)試驗服(fú)並帶乳(rǔ)膠手套做(zuò)好防(fáng)護工作(zuò)。特(tè)別(bié)是檢(jiǎn)測(cè)血(xiě)液(yè)或者(zhě)其他(tā)體液標本時,請按國(guó)家(jiā)生(shēng)物試(shì)驗(yàn)室安全防護(hù)條列執行。
本公(gōng)司(sī)產品僅用於(yú)科研。
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