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PCR檢測試(shì)劑(jì)盒(hé)
商(shāng)品(pǐn)屬(shǔ)性
| 產品(pǐn)名(míng)稱 | 英文(wén)名(míng)稱 | 貨號(hào) |
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巴(bā)西(xī)利(lì)什(shí)曼蟲 |
Leishmania braziliensis |
YS-P014364 |
分類：PCR檢測試劑盒(hé)
儲存(cún)條件(jiàn)：-20℃避光(guāng)保存，避(bì)免(miǎn)反復凍(dòng)融。
運輸：低(dī)溫，避光(guāng)。
有效(xiào)期：一(yī)年
貨期：現貨(huò)PCR試劑盒的有效(xiào)期(qī)一般為1年(nián)，這是指(zhǐ)在(zài)適(shì)當的儲(chǔ)存溫(wēn)度下。核(hé)酸擴(kuò)增(zēng)部分的試劑(jì)一(yī)般要貯(zhù)存(cún)於-20℃下(xià)，產物檢(jiǎn)測部分(fēn)試(shì)劑則貯存於(yú)2-8℃。盡量(liáng)避(bì)免反(fǎn)復凍(dòng)融。
【結(jié)果(guǒ)分析條(tiáo)件(jiàn)設定】
u 閾值(Threshold)設(shè)定：將閾(yù)值(zhí)綫(xiàn)設定在剛好超過正(zhèng)常(cháng)陰性(xìng)質(zhì)控(kòng)品擴(kuò)增曲綫(xiàn)的最高(gāo)點。
【質(zhì)控標準(zhǔn)】
2. 陽(yáng)性質控品(pǐn)的檢測(cè)結(jié)果應為(wéi)陽性，有明(míng)顯的(dí)指數擴增期(qī)，Ct值(zhí)應(yīng)小(xiǎo)於等(děng)於35；
3. 以(yǐ)上要求需在一次(cì)實(shí)驗中(zhōng)同時滿足，否則(zé)該次(cì)實驗(yàn)視為無效。
【結果(guǒ)判(pàn)斷(duàn)】
2.可疑：有明(míng)顯的(dí)指數擴增期(qī)，且(qiě)38≤Ct<40，此時(shí)樣(yàng)本為可疑樣本；對於可疑樣本(běn)建(jiàn)議(yì)復(fù)核(hé)一次，若(ruò)復核結果(guǒ)Ct<40且(qiě)有指數擴增期，則(zé)判定為陽性(xìng)，否(fǒu)則判定(dìng)為陰性(xìng)；
3. 陰性：無(wú)指(zhǐ)數擴(kuò)增期，Ct=40或(huò)無Ct值均判(pàn)定為陰(yīn)性樣本。
【對檢(jiǎn)驗結(jié)果(guǒ)的解釋】
1. 實(shí)驗(yàn)室環境汙(wū)染，試(shì)劑汙(wū)染(rǎn)，樣品交叉汙(wū)染會出現(xiàn)假陽(yáng)性結果；
2. 試劑運(yùn)輸，保(bǎo)存(cún)不當(dāng)或試(shì)劑配製(zhì)不準(zhǔn)確引(yǐn)起的(dí)試劑檢測效(xiào)能(néng)下降(jiàng)，可(kě)能會導致出(chū)現(xiàn)假(jiǎ)陰性(xìng)結果。
PCR反(fǎn)應的特異性(xìng)：
②鹼基(jī)配對(duì)原則；
③Taq DNA聚(jù)合(hé)酶(méi)合成(chéng)反應(yīng)的忠實性；
④靶(bǎ)基因的特(tè)異性與(yǔ)保守(shǒu)性。
巴西利(lì)什曼(màn)蟲(chóng)其中引物(wù)與模(mó)板的(dí)正(zhèng)確(què)結合(hé)是(shì)關鍵。引(yǐn)物與模板(bǎn)的(dí)結(jié)合(hé)及引物鏈(liàn)的延伸(shēn)是遵循鹼(jiǎn)基配對(duì)原(yuán)則(zé)的(dí)。聚合(hé)酶合(hé)成(chéng)反應(yīng)的(dí)忠(zhōng)實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐(nài)高(gāo)溫(wēn)性，使反應中模板與引物的(dí)結合(復性(xìng))可以在(zài)較高的(dí)溫度下進行，結合的特異(yì)性(xìng)大大增(zēng)加(jiā)，被(bèi)擴增(zēng)的(dí)靶(bǎ)基(jī)因片(piàn)段也就能(néng)保(bǎo)持很高的(dí)正確度。再通過(guò)選擇特異性和保(bǎo)守性高的(dí)靶基因區，其特異(yì)性程度(dù)就(jiù)更高(gāo)。
(2) 靈敏度高(gāo)
PCR產(chǎn)物的生成量是以(yǐ)指(zhǐ)數(shù)方式增加的(dí)，能(néng)將(jiāng)皮克(kè)(pg=10-12g)量(liáng)級(jí)的起始待測(cè)模板(bǎn)擴(kuò)增到(dào)微克(ug=10-6g)水(shuǐ)平(píng)。能從(cóng)100萬(wàn)個細胞中檢出(chū)一(yī)個(gè)靶細胞；在病毒的檢(jiǎn)測中，PCR的(dí)靈敏(mǐn)度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位(wèi))；在細菌(jūn)學中zui小檢(jiǎn)出率為3個細菌(jūn)。
(3) 簡便，快(kuài)速
PCR反(fǎn)應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次(cì)性地將反(fǎn)應液(yè)加好後(hòu)，即在DNA擴增(zēng)液(yè)和(hé)水(shuǐ)浴鍋(guō)上進(jìn)行變性(xìng)-退(tuì)火-延伸反應(yīng)，一(yī)般在(zài)2～4 小時完成擴增(zēng)反(fǎn)應。擴增(zēng)產物一般用(yòng)電(diàn)泳分(fēn)析(xī)，不一定要用同(tóng)位(wèi)素(sù)，無(wú)放射性(xìng)汙染(rǎn)，易(yì)推(tuī)廣。
(4) 對標本的(dí)純度要求(qiú)低(dī)
不(bù)需要(yào)分(fēn)離(lí)病(bìng)毒(dú)或細菌(jūn)及(jí)培(péi)養(yǎng)細胞，DNA 粗(cū)製品(pǐn)及總(zǒng)RNA均(jūn)可(kě)作(zuò)為(wéi)擴(kuò)增(zēng)模板。可(kě)直接用臨(lín)床標(biāo)本(běn)如血液(yè)，體(tǐ)腔(qiāng)液(yè)，洗(xǐ)嗽液(yè)，毛發(fā)，細(xì)胞，活PCR技術(shù)概(gài)論。
