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PCR檢測試劑盒(hé)
商(shāng)品屬(shǔ)性(xìng)
| 產品(pǐn)名稱 | 英(yīng)文名(míng)稱 | 貨號 |
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輪狀病毒通用PCR檢測試劑盒 |
Rotavirus RTPCR |
YS-P014693 |
分(fēn)類(lèi)：PCR檢測試(shì)劑(jì)盒
儲(chǔ)存條件(jiàn)：-20℃避光保存，避免反復凍(dòng)融。
運(yùn)輸：低(dī)溫，避光(guāng)。
有效期：一年
貨期：現貨PCR試(shì)劑盒的(dí)有效(xiào)期(qī)一(yī)般(bān)為1年，這是指(zhǐ)在(zài)適(shì)當(dāng)的(dí)儲存(cún)溫(wēn)度下(xià)。核酸擴增部分(fēn)的(dí)試(shì)劑(jì)一般(bān)要(yào)貯(zhù)存(cún)於(yú)-20℃下(xià)，產物(wù)檢測部分試劑則貯存於2-8℃。盡(jìn)量(liáng)避免反(fǎn)復凍(dòng)融(róng)。
【結果分析(xī)條件(jiàn)設定】
u 閾值(zhí)(Threshold)設定(dìng)：將閾值綫(xiàn)設(shè)定在(zài)剛(gāng)好(hǎo)超(chāo)過正(zhèng)常(cháng)陰性質控(kòng)品擴增曲(qū)綫的最(zuì)高點(diǎn)。
【質(zhì)控標準(zhǔn)】
2. 陽(yáng)性質控品(pǐn)的檢測結(jié)果(guǒ)應為陽性，有明顯的(dí)指(zhǐ)數擴增期，Ct值應(yīng)小於等於35；
3. 以(yǐ)上(shàng)要求需在(zài)一次實(shí)驗中同(tóng)時(shí)滿(mǎn)足，否則該次實(shí)驗(yàn)視(shì)為無效。
【結果判斷(duàn)】
2.可疑(yí)：有明顯的指數擴(kuò)增(zēng)期，且38≤Ct<40，此時樣本為可疑(yí)樣(yàng)本；對於可疑樣本(běn)建(jiàn)議復(fù)核一次(cì)，若(ruò)復(fù)核結果Ct<40且有(yǒu)指數擴(kuò)增期，則判定(dìng)為陽性，否(fǒu)則判定(dìng)為陰(yīn)性；
3. 陰性：無(wú)指數(shù)擴增期(qī)，Ct=40或(huò)無(wú)Ct值(zhí)均(jūn)判定(dìng)為陰性(xìng)樣本(běn)。
【對檢驗結果的解(jiě)釋(shì)】
1. 實驗室環(huán)境汙(wū)染(rǎn)，試劑(jì)汙染，樣品交(jiāo)叉汙染會(huì)出(chū)現假(jiǎ)陽(yáng)性結果；
2. 試(shì)劑運輸(shū)，保存不(bù)當或試劑(jì)配製不準確(què)引(yǐn)起(qǐ)的試劑(jì)檢(jiǎn)測效能下降(jiàng)，可能會導致(zhì)出(chū)現假陰性(xìng)結(jié)果。
PCR反應的(dí)特異(yì)性(xìng)：
②鹼基(jī)配對原則(zé)；
③Taq DNA聚(jù)合酶(méi)合成反應的(dí)忠實性；
④靶基(jī)因的特異性與保守性。
輪狀病(bìng)毒通(tōng)用(yòng)PCR檢測(cè)試(shì)劑盒(hé)其中引物與模(mó)板(bǎn)的(dí)正(zhèng)確結(jié)合(hé)是關鍵。引(yǐn)物(wù)與(yǔ)模(mó)板的(dí)結(jié)合及引(yǐn)物鏈的延伸是遵循(xún)鹼基(jī)配對原則的(dí)。聚(jù)合酶(méi)合(hé)成反應(yīng)的忠實性(xìng)及(jí)Taq DNA聚合酶耐(nài)高溫(wēn)性，使(shǐ)反應中模(mó)板與引物的結(jié)合(hé)(復(fù)性)可(kě)以(yǐ)在較(jiào)高(gāo)的(dí)溫度下(xià)進行，結(jié)合的(dí)特異(yì)性(xìng)大大(dà)增加，被擴(kuò)增的靶基(jī)因(yīn)片(piàn)段也就(jiù)能保持很(hěn)高(gāo)的(dí)正確度。再(zài)通過(guò)選擇(zé)特異性和保守性(xìng)高的靶基因(yīn)區，其特異性(xìng)程度(dù)就(jiù)更高(gāo)。
(2) 靈敏度高
PCR產物的(dí)生(shēng)成量是(shì)以指(zhǐ)數方式(shì)增(zēng)加的，能(néng)將皮克(pg=10-12g)量級的(dí)起始待(dài)測(cè)模(mó)板(bǎn)擴增(zēng)到(dào)微(wēi)克(ug=10-6g)水平。能從(cóng)100萬(wàn)個(gè)細胞(bāo)中檢出一(yī)個(gè)靶(bǎ)細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空(kōng)斑形成(chéng)單(dān)位)；在(zài)細菌(jūn)學中(zhōng)zui小檢(jiǎn)出率(shuài)為(wéi)3個(gè)細菌。
(3) 簡(jiǎn)便，快(kuài)速
PCR反(fǎn)應用耐(nài)高溫的Taq DNA聚合(hé)酶，一次性(xìng)地(dì)將(jiāng)反(fǎn)應液(yè)加好後(hòu)，即(jí)在DNA擴(kuò)增(zēng)液(yè)和(hé)水(shuǐ)浴鍋(guō)上進(jìn)行變性(xìng)-退火-延伸反應(yīng)，一般(bān)在2～4 小時完成(chéng)擴(kuò)增(zēng)反應(yīng)。擴(kuò)增(zēng)產物(wù)一般用電泳分析，不一(yī)定要(yào)用(yòng)同位素，無放(fàng)射性汙染(rǎn)，易推(tuī)廣。
(4) 對標(biāo)本(běn)的純度(dù)要(yào)求(qiú)低
不需要分離(lí)病毒或(huò)細(xì)菌及(jí)培養(yǎng)細(xì)胞(bāo)，DNA 粗製品及總(zǒng)RNA均可作(zuò)為擴增(zēng)模板(bǎn)。可直接用臨床標本如血液(yè)，體(tǐ)腔(qiāng)液(yè)，洗嗽(sòu)液(yè)，毛(máo)發，細胞(bāo)，活PCR技術概(gài)論(lùn)。
