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PCR檢測試(shì)劑盒(hé)
商品(pǐn)屬(shǔ)性
| 產品(pǐn)名稱 | 英(yīng)文名(míng)稱 | 貨(huò)號 |
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中(zhōng)華(huá)根(gēn)瘤菌通(tōng)用PCR檢(jiǎn)測(cè)試劑盒 |
Sinorhizobium spp.PCR |
YS-P014757 |
分類(lèi)：PCR檢(jiǎn)測試劑盒
儲存(cún)條(tiáo)件：-20℃避(bì)光保(bǎo)存(cún)，避(bì)免反(fǎn)復凍(dòng)融(róng)。
運輸：低溫，避光。
有效(xiào)期：一(yī)年
貨期：現貨PCR試(shì)劑盒的有(yǒu)效期一般為1年，這(zhè)是(shì)指在(zài)適(shì)當(dāng)的(dí)儲存溫(wēn)度下。核(hé)酸擴增部(bù)分(fēn)的(dí)試劑(jì)一般要(yào)貯(zhù)存(cún)於-20℃下，產物(wù)檢測(cè)部分試(shì)劑則(zé)貯(zhù)存於(yú)2-8℃。盡量(liáng)避免(miǎn)反復凍融(róng)。
【結果分析條(tiáo)件(jiàn)設(shè)定】
u 閾值(zhí)(Threshold)設(shè)定：將閾值綫設(shè)定在(zài)剛好超過正常(cháng)陰性(xìng)質控(kòng)品擴增(zēng)曲綫的最(zuì)高(gāo)點。
【質控(kòng)標準】
2. 陽(yáng)性質(zhì)控(kòng)品的(dí)檢測結果應為(wéi)陽性，有(yǒu)明顯的指數擴增期(qī)，Ct值應小於(yú)等(děng)於(yú)35；
3. 以上要求(qiú)需(xū)在一(yī)次(cì)實驗(yàn)中同時(shí)滿足(zú)，否則該(gāi)次實驗(yàn)視為無效。
【結果判斷】
2.可疑：有(yǒu)明顯(xiǎn)的指數擴增期(qī)，且(qiě)38≤Ct<40，此(cǐ)時樣(yàng)本(běn)為可(kě)疑樣本(běn)；對(duì)於可疑樣本建(jiàn)議(yì)復(fù)核(hé)一(yī)次，若復(fù)核(hé)結果Ct<40且(qiě)有指(zhǐ)數擴(kuò)增期(qī)，則判(pàn)定為(wéi)陽性，否則判定為(wéi)陰性；
3. 陰(yīn)性：無指(zhǐ)數擴增期，Ct=40或(huò)無Ct值(zhí)均判(pàn)定(dìng)為陰性(xìng)樣(yàng)本(běn)。
【對檢驗(yàn)結果的解釋】
1. 實(shí)驗室(shì)環境(jìng)汙(wū)染(rǎn)，試劑汙染，樣品交(jiāo)叉(chā)汙染(rǎn)會出現假(jiǎ)陽(yáng)性結果；
2. 試(shì)劑(jì)運(yùn)輸，保(bǎo)存不(bù)當(dāng)或試劑配(pèi)製不準(zhǔn)確引起(qǐ)的試劑(jì)檢測效(xiào)能(néng)下(xià)降，可(kě)能(néng)會導(dǎo)致出現(xiàn)假陰(yīn)性(xìng)結果。
PCR反(fǎn)應的特異(yì)性：
②鹼基(jī)配對原則(zé)；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的(dí)忠(zhōng)實性(xìng)；
④靶基因的(dí)特異性與保守性(xìng)。
中華根瘤菌(jūn)通用PCR檢(jiǎn)測試劑(jì)盒(hé)其中引物(wù)與模板(bǎn)的正確(què)結(jié)合是(shì)關鍵(jiàn)。引物(wù)與模(mó)板(bǎn)的結合及引物(wù)鏈的延伸是遵(zūn)循(xún)鹼基(jī)配對原則的。聚合酶合(hé)成反應(yīng)的忠(zhōng)實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高(gāo)溫(wēn)性(xìng)，使反應(yīng)中模板與引(yǐn)物(wù)的結合(hé)(復(fù)性)可以(yǐ)在(zài)較(jiào)高的(dí)溫(wēn)度下進行(háng)，結合的(dí)特異性大大(dà)增(zēng)加，被擴增的靶基因片(piàn)段也就能保持(chí)很(hěn)高(gāo)的(dí)正確(què)度。再通過選擇(zé)特(tè)異(yì)性和保守性高的靶基(jī)因區(qū)，其特(tè)異(yì)性程度就(jiù)更(gēng)高。
(2) 靈敏度(dù)高(gāo)
PCR產(chǎn)物的生成(chéng)量(liáng)是(shì)以(yǐ)指數(shù)方式增(zēng)加(jiā)的，能(néng)將(jiāng)皮克(pg=10-12g)量級的起始(shǐ)待測模(mó)板(bǎn)擴增到(dào)微(wēi)克(ug=10-6g)水平(píng)。能(néng)從100萬個細胞中檢(jiǎn)出(chū)一個靶細胞(bāo)；在病(bìng)毒(dú)的檢測中，PCR的(dí)靈敏(mǐn)度(dù)可達(dá)3個RFU(空斑形成單(dān)位(wèi))；在細菌(jūn)學(xué)中zui小檢(jiǎn)出率(shuài)為(wéi)3個細菌。
(3) 簡便，快(kuài)速(sù)
PCR反(fǎn)應(yīng)用耐高溫的(dí)Taq DNA聚合酶，一(yī)次性地將(jiāng)反應液加好(hǎo)後，即(jí)在(zài)DNA擴增(zēng)液(yè)和水浴(yù)鍋(guō)上(shàng)進行(háng)變(biàn)性-退火-延(yán)伸反(fǎn)應，一般(bān)在(zài)2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般(bān)用(yòng)電泳分析，不(bù)一(yī)定要(yào)用同位(wèi)素，無(wú)放射性(xìng)汙染，易(yì)推廣(guǎng)。
(4) 對標本的純度(dù)要求低(dī)
不需要分(fēn)離(lí)病(bìng)毒或(huò)細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗製(zhì)品(pǐn)及總RNA均可作(zuò)為擴(kuò)增模(mó)板(bǎn)。可(kě)直接用(yòng)臨床標本如血液(yè)，體(tǐ)腔液，洗(xǐ)嗽液，毛發，細(xì)胞，活(huó)PCR技術(shù)概論(lùn)。
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