產(chǎn)品中心(xīn)
PCR檢(jiǎn)測(cè)試劑盒(hé)
單(dān)增(zēng)李斯特(tè)菌(jūn)prfA基因(bp)常規(guī)PCR檢測(cè)試(shì)劑盒
商品屬(shǔ)性
| 產品名(míng)稱 | 規格 | 貨號 |
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單增(zēng)李斯(sī)特菌(jūn)prfA基(jī)因(bp)常(cháng)規PCR檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑(jì)盒(hé) |
50T |
YS-P014997 |
儲(chǔ)存條件(jiàn)：-20℃避光保存，避免(miǎn)反(fǎn)復凍融。
運(yùn)輸(shū)：低(dī)溫，避(bì)光(guāng)。
有效(xiào)期(qī)：一年
貨(huò)期(qī)：現(xiàn)貨PCR試(shì)劑(jì)盒的(dí)有效(xiào)期(qī)一(yī)般為1年(nián)，這(zhè)是(shì)指在(zài)適當(dāng)的(dí)儲(chǔ)存(cún)溫(wēn)度(dù)下(xià)。核酸擴增部(bù)分(fēn)的試劑一(yī)般要(yào)貯存(cún)於-20℃下，產(chǎn)物檢(jiǎn)測(cè)部分(fēn)試劑(jì)則(zé)貯(zhù)存於(yú)2-8℃。盡量(liáng)避(bì)免反(fǎn)復凍(dòng)融(róng)。
【結果分析條件設(shè)定】
u 閾值(Threshold)設(shè)定(dìng)：將(jiāng)閾(yù)值綫設(shè)定(dìng)在(zài)剛(gāng)好(hǎo)超(chāo)過正常陰性質控品擴增(zēng)曲綫的(dí)最(zuì)高點。
【質控(kòng)標準】
2. 陽性質控品(pǐn)的(dí)檢測(cè)結果應(yīng)為(wéi)陽(yáng)性，有(yǒu)明(míng)顯(xiǎn)的指(zhǐ)數擴(kuò)增期(qī)，Ct值應小(xiǎo)於(yú)等於(yú)35；
3. 以(yǐ)上要求需在(zài)一(yī)次實(shí)驗中同時滿(mǎn)足，否(fǒu)則(zé)該次(cì)實(shí)驗(yàn)視為無效(xiào)。
【結(jié)果判斷(duàn)】
2.可疑：有明顯的指數(shù)擴(kuò)增(zēng)期，且38≤Ct<40，此時樣本為可(kě)疑(yí)樣本(běn)；對(duì)於(yú)可(kě)疑(yí)樣本(běn)建議復核一次(cì)，若(ruò)復(fù)核(hé)結(jié)果Ct<40且(qiě)有指數擴增期，則判(pàn)定(dìng)為陽性(xìng)，否(fǒu)則(zé)判(pàn)定為(wéi)陰性(xìng)；
3. 陰(yīn)性(xìng)：無(wú)指數擴(kuò)增(zēng)期(qī)，Ct=40或無(wú)Ct值均判(pàn)定為(wéi)陰性樣本。
【對檢驗(yàn)結果(guǒ)的(dí)解釋】
1. 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境汙(wū)染(rǎn)，試(shì)劑汙染，樣(yàng)品交叉汙(wū)染會出現假陽(yáng)性(xìng)結果(guǒ)；
2. 試(shì)劑運輸(shū)，保(bǎo)存不當或(huò)試劑配(pèi)製(zhì)不準確引起的(dí)試劑檢(jiǎn)測效能下降(jiàng)，可能會(huì)導(dǎo)致(zhì)出現假陰性結(jié)果。
PCR反應的特(tè)異性：
②鹼(jiǎn)基(jī)配(pèi)對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成(chéng)反應的(dí)忠(zhōng)實(shí)性(xìng)；
④靶(bǎ)基(jī)因的特異(yì)性與保(bǎo)守性(xìng)。
單(dān)增李(lǐ)斯(sī)特(tè)菌prfA基(jī)因(bp)常規(guī)PCR檢測(cè)試(shì)劑盒其中(zhōng)引物(wù)與(yǔ)模板的正(zhèng)確結合是(shì)關鍵(jiàn)。引(yǐn)物與模板的結合及引(yǐn)物鏈的(dí)延(yán)伸(shēn)是(shì)遵循(xún)鹼基(jī)配對原(yuán)則(zé)的。聚合(hé)酶合成反應的(dí)忠實性(xìng)及Taq DNA聚合酶耐高(gāo)溫性，使反應(yīng)中模板與(yǔ)引(yǐn)物(wù)的(dí)結(jié)合(復(fù)性)可以(yǐ)在較(jiào)高(gāo)的(dí)溫(wēn)度(dù)下進(jìn)行(háng)，結(jié)合(hé)的(dí)特異(yì)性大大(dà)增加，被(bèi)擴增的靶(bǎ)基(jī)因(yīn)片(piàn)段也就(jiù)能(néng)保(bǎo)持(chí)很(hěn)高(gāo)的(dí)正確(què)度(dù)。再通(tōng)過選擇特異(yì)性和保(bǎo)守性(xìng)高的靶基因區，其(qí)特異性程度(dù)就(jiù)更高(gāo)。
(2) 靈敏度高(gāo)
PCR產(chǎn)物的生成量是以(yǐ)指數(shù)方(fāng)式(shì)增(zēng)加的，能將(jiāng)皮克(kè)(pg=10-12g)量級(jí)的(dí)起始待(dài)測模板(bǎn)擴(kuò)增(zēng)到微(wēi)克(ug=10-6g)水平。能從(cóng)100萬個細胞中(zhōng)檢(jiǎn)出(chū)一(yī)個靶細胞(bāo)；在(zài)病毒的檢測(cè)中，PCR的靈(líng)敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空(kōng)斑形成(chéng)單(dān)位)；在細菌(jūn)學(xué)中(zhōng)zui小檢(jiǎn)出率(shuài)為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便，快速
PCR反(fǎn)應用(yòng)耐高溫(wēn)的(dí)Taq DNA聚合(hé)酶，一(yī)次性地將反應液加(jiā)好後，即在DNA擴增液和(hé)水浴鍋上(shàng)進行變性(xìng)-退(tuì)火-延伸(shēn)反應(yīng)，一般在(zài)2～4 小(xiǎo)時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物(wù)一(yī)般用電(diàn)泳分析，不一(yī)定(dìng)要用同(tóng)位素，無(wú)放射性汙染(rǎn)，易推廣(guǎng)。
(4) 對標本的(dí)純(chún)度要(yào)求低
不(bù)需(xū)要分離(lí)病毒或細菌(jūn)及培養細胞，DNA 粗製品及總RNA均可作(zuò)為(wéi)擴增模板。可(kě)直接用臨(lín)床標(biāo)本(běn)如(rú)血液，體(tǐ)腔液，洗嗽液，毛發，細(xì)胞(bāo)，活PCR技術概(gài)論(lùn)。
