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PCR檢測試(shì)劑盒(hé)
軍(jūn)團菌(jūn)S rRNA基(jī)因熒(yíng)光PCR檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑(jì)盒(hé)(探(tàn)針(zhēn)法(fǎ))
商品(pǐn)屬性
| 產(chǎn)品(pǐn)名稱 | 規(guī)格 | 貨(huò)號 |
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軍團(tuán)菌(jūn)S rRNA基因(yīn)熒光PCR檢測試(shì)劑(jì)盒(探針法) |
50T |
YS-P015084 |
儲存條(tiáo)件：-20℃避光保(bǎo)存，避免反(fǎn)復凍(dòng)融(róng)。
運(yùn)輸(shū)：低(dī)溫(wēn)，避光(guāng)。
有效期(qī)：一年(nián)
貨(huò)期(qī)：現貨PCR試劑(jì)盒的(dí)有效(xiào)期一般為(wéi)1年，這是(shì)指在(zài)適當的儲(chǔ)存溫度下。核酸擴(kuò)增部(bù)分的(dí)試(shì)劑(jì)一般要(yào)貯存於-20℃下，產物(wù)檢測部(bù)分(fēn)試劑(jì)則貯存於2-8℃。盡量(liáng)避免反(fǎn)復凍(dòng)融。
【結(jié)果分(fēn)析條件(jiàn)設(shè)定】
u 閾值(zhí)(Threshold)設(shè)定(dìng)：將閾值綫(xiàn)設定在(zài)剛好超過(guò)正常陰性(xìng)質控(kòng)品擴增曲綫的(dí)最高點。
【質(zhì)控標準】
2. 陽性質控(kòng)品(pǐn)的檢測結果(guǒ)應(yīng)為陽(yáng)性(xìng)，有明顯的指(zhǐ)數擴增期，Ct值應(yīng)小於等於35；
3. 以上(shàng)要求(qiú)需在(zài)一次(cì)實驗中同時滿(mǎn)足，否(fǒu)則該次實驗(yàn)視為(wéi)無效(xiào)。
【結果(guǒ)判斷】
2.可(kě)疑：有(yǒu)明(míng)顯(xiǎn)的指數(shù)擴增(zēng)期(qī)，且38≤Ct<40，此(cǐ)時樣本為(wéi)可疑(yí)樣本(běn)；對於可(kě)疑(yí)樣本(běn)建(jiàn)議復(fù)核一次(cì)，若(ruò)復核(hé)結果(guǒ)Ct<40且有指數(shù)擴增(zēng)期(qī)，則(zé)判定(dìng)為陽性，否(fǒu)則判(pàn)定為陰性；
3. 陰性(xìng)：無(wú)指(zhǐ)數擴增期，Ct=40或無Ct值(zhí)均判定(dìng)為陰性(xìng)樣本。
【對檢(jiǎn)驗結(jié)果的(dí)解釋(shì)】
1. 實驗室(shì)環境(jìng)汙(wū)染(rǎn)，試劑汙(wū)染(rǎn)，樣(yàng)品交(jiāo)叉汙染(rǎn)會(huì)出現假陽(yáng)性結(jié)果；
2. 試劑(jì)運輸，保存(cún)不當或(huò)試(shì)劑(jì)配製(zhì)不準確引(yǐn)起的試劑檢測效(xiào)能下降(jiàng)，可能會導致出現假陰(yīn)性(xìng)結果。
PCR反應(yīng)的特(tè)異性：
②鹼基(jī)配對原則；
③Taq DNA聚(jù)合(hé)酶合成(chéng)反應(yīng)的忠(zhōng)實(shí)性；
④靶基(jī)因的(dí)特異性(xìng)與保守性。
軍團菌(jūn)S rRNA基因熒光PCR檢測(cè)試(shì)劑(jì)盒(探針(zhēn)法)其中引(yǐn)物與(yǔ)模板(bǎn)的正(zhèng)確(què)結(jié)合(hé)是關(guān)鍵。引(yǐn)物與模(mó)板的結合及引物(wù)鏈的延伸(shēn)是遵(zūn)循(xún)鹼基配對原(yuán)則的(dí)。聚合酶合(hé)成反(fǎn)應(yīng)的(dí)忠實性及Taq DNA聚合酶(méi)耐高溫性(xìng)，使(shǐ)反(fǎn)應中(zhōng)模板與(yǔ)引物的(dí)結(jié)合(復性)可以在(zài)較高的(dí)溫度下(xià)進行，結合的(dí)特(tè)異(yì)性(xìng)大大(dà)增加(jiā)，被擴增的(dí)靶基(jī)因片段也就能保持(chí)很高(gāo)的(dí)正(zhèng)確(què)度。再(zài)通(tōng)過選(xuǎn)擇(zé)特(tè)異(yì)性和(hé)保(bǎo)守(shǒu)性高的靶基因區，其特異性程(chéng)度就(jiù)更(gēng)高(gāo)。
(2) 靈敏度(dù)高
PCR產(chǎn)物的生成量是(shì)以(yǐ)指數(shù)方式增(zēng)加的，能將(jiāng)皮(pí)克(kè)(pg=10-12g)量級(jí)的(dí)起始(shǐ)待測模板(bǎn)擴(kuò)增到(dào)微克(ug=10-6g)水(shuǐ)平。能從(cóng)100萬(wàn)個細(xì)胞中檢出(chū)一個靶細胞；在病毒(dú)的檢測(cè)中，PCR的靈敏度(dù)可(kě)達3個(gè)RFU(空斑形(xíng)成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小(xiǎo)檢出(chū)率為(wéi)3個細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便(biàn)，快速(sù)
PCR反應用(yòng)耐(nài)高(gāo)溫的Taq DNA聚合(hé)酶(méi)，一次(cì)性地將(jiāng)反應液(yè)加好(hǎo)後(hòu)，即在DNA擴增液和水浴鍋(guō)上進行變性(xìng)-退(tuì)火(huǒ)-延伸反應(yīng)，一(yī)般(bān)在2～4 小(xiǎo)時(shí)完成(chéng)擴增反應(yīng)。擴增產物一般(bān)用電(diàn)泳分(fēn)析(xī)，不(bù)一(yī)定(dìng)要用(yòng)同(tóng)位素，無放(fàng)射性(xìng)汙(wū)染(rǎn)，易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要(yào)求(qiú)低
不需要(yào)分(fēn)離(lí)病毒(dú)或(huò)細菌及培(péi)養細(xì)胞(bāo)，DNA 粗製品及總RNA均可(kě)作(zuò)為擴增(zēng)模(mó)板。可(kě)直接用(yòng)臨床標本如血液，體(tǐ)腔液(yè)，洗嗽液，毛發，細胞(bāo)，活(huó)PCR技術(shù)概論(lùn)。
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