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PCR檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑盒(hé)
| 產品(pǐn)名(míng)稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
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通(tōng)用型禽流感病毒RT-PCR檢測(cè)試(shì)劑(jì)盒(hé) |
50T |
YS-P015263 |
儲存條件:-20℃避(bì)光(guāng)保存(cún),避免反復(fù)凍融。
運輸:低(dī)溫,避光。
有(yǒu)效(xiào)期(qī):一年
貨期(qī):現(xiàn)貨PCR試劑盒的有效(xiào)期一般為1年,這是(shì)指在適當的儲(chǔ)存(cún)溫(wēn)度下。核酸擴(kuò)增部分的(dí)試劑一(yī)般(bān)要貯存於-20℃下(xià),產(chǎn)物(wù)檢(jiǎn)測(cè)部(bù)分(fēn)試劑(jì)則貯存於2-8℃。盡量(liáng)避(bì)免反復(fù)凍(dòng)融。

u 閾(yù)值(zhí)(Threshold)設(shè)定:將(jiāng)閾值綫(xiàn)設定在(zài)剛好超(chāo)過正常陰(yīn)性(xìng)質(zhì)控(kòng)品擴增曲綫的最高點。
2. 陽(yáng)性(xìng)質(zhì)控品(pǐn)的(dí)檢測結(jié)果應為陽(yáng)性,有明(míng)顯(xiǎn)的指(zhǐ)數(shù)擴(kuò)增(zēng)期,Ct值(zhí)應(yīng)小(xiǎo)於等(děng)於35;
3. 以(yǐ)上要求(qiú)需(xū)在一次實驗中同(tóng)時滿足(zú),否(fǒu)則該次實驗視為(wéi)無效(xiào)。
2.可疑(yí):有明顯的(dí)指數(shù)擴(kuò)增期,且(qiě)38≤Ct<40,此(cǐ)時(shí)樣本為可(kě)疑(yí)樣本(běn);對於可疑(yí)樣(yàng)本建(jiàn)議復核(hé)一次,若(ruò)復(fù)核(hé)結果(guǒ)Ct<40且(qiě)有(yǒu)指(zhǐ)數(shù)擴增期,則(zé)判定(dìng)為(wéi)陽性,否則判(pàn)定為陰(yīn)性;
3. 陰性:無(wú)指數擴增(zēng)期(qī),Ct=40或(huò)無Ct值均判定(dìng)為陰(yīn)性樣(yàng)本。
【對檢(jiǎn)驗結果的解釋(shì)】
1. 實(shí)驗室(shì)環(huán)境汙(wū)染,試(shì)劑汙染(rǎn),樣(yàng)品交(jiāo)叉汙染(rǎn)會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結果(guǒ);
2. 試(shì)劑運(yùn)輸(shū),保存不當或(huò)試(shì)劑配製不(bù)準(zhǔn)確引起(qǐ)的試(shì)劑(jì)檢(jiǎn)測效能(néng)下(xià)降(jiàng),可(kě)能會導致(zhì)出現假陰性結(jié)果(guǒ)。

②鹼(jiǎn)基配(pèi)對(duì)原(yuán)則;
③Taq DNA聚(jù)合酶(méi)合成(chéng)反應的忠實性;
④靶(bǎ)基(jī)因的特異(yì)性(xìng)與保(bǎo)守(shǒu)性(xìng)。
通用型禽流感(gǎn)病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒其(qí)中(zhōng)引(yǐn)物(wù)與模板(bǎn)的正確(què)結合(hé)是關鍵(jiàn)。引物(wù)與模板(bǎn)的結(jié)合及(jí)引(yǐn)物鏈的延伸是(shì)遵循(xún)鹼(jiǎn)基配對原則的。聚合酶合成反應的(dí)忠實(shí)性及Taq DNA聚合(hé)酶(méi)耐(nài)高溫性,使反(fǎn)應(yīng)中模板(bǎn)與引(yǐn)物(wù)的(dí)結合(hé)(復性(xìng))可以在(zài)較高的溫度下進行,結(jié)合(hé)的特(tè)異(yì)性大大增加(jiā),被(bèi)擴(kuò)增的(dí)靶基(jī)因片(piàn)段也就(jiù)能保持很(hěn)高(gāo)的正(zhèng)確度(dù)。再通過選(xuǎn)擇(zé)特(tè)異性(xìng)和保守性高(gāo)的靶基因區(qū),其特異性(xìng)程度就(jiù)更高(gāo)。
(2) 靈敏度高(gāo)
PCR產物(wù)的(dí)生成量是以(yǐ)指(zhǐ)數(shù)方式增加(jiā)的(dí),能(néng)將皮(pí)克(kè)(pg=10-12g)量級的(dí)起(qǐ)始(shǐ)待測模(mó)板擴增到微克(ug=10-6g)水(shuǐ)平。能從100萬(wàn)個(gè)細胞中檢出(chū)一(yī)個靶細(xì)胞(bāo);在病毒(dú)的(dí)檢(jiǎn)測(cè)中(zhōng),PCR的靈敏(mǐn)度可(kě)達(dá)3個(gè)RFU(空斑(bān)形成單位);在(zài)細(xì)菌(jūn)學中zui小檢(jiǎn)出率為3個(gè)細(xì)菌(jūn)。
(3) 簡便,快速(sù)
PCR反(fǎn)應用耐高溫的Taq DNA聚合(hé)酶(méi),一(yī)次性地將(jiāng)反應(yīng)液加(jiā)好後,即在(zài)DNA擴增液和(hé)水浴鍋上進行變性(xìng)-退火-延伸反(fǎn)應,一般在2~4 小時(shí)完(wán)成(chéng)擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產物(wù)一(yī)般用電泳分析,不一定要(yào)用同位(wèi)素,無放(fàng)射性汙(wū)染,易(yì)推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的(dí)純(chún)度要(yào)求低
不(bù)需(xū)要分離病毒(dú)或(huò)細(xì)菌及培養(yǎng)細胞(bāo),DNA 粗(cū)製品及總RNA均(jūn)可作為(wéi)擴增(zēng)模板。可直接(jiē)用(yòng)臨床標本如血液,體腔液,洗(xǐ)嗽液(yè),毛發(fā),細(xì)胞,活(huó)PCR技(jì)術概(gài)論。
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