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PCR檢測試(shì)劑(jì)盒(hé)
| 產品(pǐn)名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號 |
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小反(fǎn)芻獸(shòu)RT-PCR檢測(cè)試劑盒(hé) |
50T |
YS-P015278 |
儲(chǔ)存(cún)條(tiáo)件:-20℃避(bì)光保存,避(bì)免(miǎn)反(fǎn)復凍(dòng)融(róng)。
運輸:低(dī)溫(wēn),避(bì)光(guāng)。
有效(xiào)期:一年(nián)
貨(huò)期:現(xiàn)貨PCR試劑(jì)盒的有(yǒu)效期一般(bān)為(wéi)1年,這是(shì)指(zhǐ)在(zài)適(shì)當的儲(chǔ)存溫(wēn)度下。核(hé)酸擴增(zēng)部分(fēn)的試劑一(yī)般要貯(zhù)存於(yú)-20℃下,產物檢(jiǎn)測部分(fēn)試(shì)劑則貯(zhù)存於2-8℃。盡(jìn)量避免反復(fù)凍融。

u 閾(yù)值(Threshold)設(shè)定(dìng):將閾(yù)值綫(xiàn)設定在剛(gāng)好超過正(zhèng)常(cháng)陰(yīn)性(xìng)質(zhì)控(kòng)品擴(kuò)增(zēng)曲(qū)綫(xiàn)的最(zuì)高點。
2. 陽性(xìng)質控品的檢測結果應(yīng)為(wéi)陽(yáng)性,有明顯(xiǎn)的指數擴(kuò)增期(qī),Ct值應小(xiǎo)於等於(yú)35;
3. 以上要(yào)求(qiú)需在一次實驗中同時滿足,否則該次實(shí)驗視為無效(xiào)。
2.可疑(yí):有明顯的(dí)指數(shù)擴(kuò)增(zēng)期,且38≤Ct<40,此(cǐ)時樣本為(wéi)可疑樣(yàng)本(běn);對(duì)於可疑(yí)樣本建(jiàn)議(yì)復(fù)核(hé)一(yī)次,若復(fù)核結果Ct<40且有指(zhǐ)數擴增期,則(zé)判定(dìng)為陽性(xìng),否(fǒu)則判定(dìng)為陰(yīn)性(xìng);
3. 陰性:無(wú)指(zhǐ)數擴(kuò)增(zēng)期,Ct=40或無(wú)Ct值(zhí)均(jūn)判定為陰(yīn)性(xìng)樣本。
【對檢(jiǎn)驗結果的(dí)解(jiě)釋】
1. 實(shí)驗室環(huán)境汙染,試劑汙染(rǎn),樣(yàng)品交叉汙染會(huì)出(chū)現(xiàn)假(jiǎ)陽性結(jié)果;
2. 試劑(jì)運(yùn)輸(shū),保(bǎo)存不當或(huò)試(shì)劑配(pèi)製不準確(què)引起的試(shì)劑檢測效能(néng)下降(jiàng),可(kě)能(néng)會導致(zhì)出現(xiàn)假陰(yīn)性(xìng)結果(guǒ)。

②鹼(jiǎn)基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶(méi)合成(chéng)反應的忠實性;
④靶基(jī)因的特異性與保(bǎo)守(shǒu)性。
小反(fǎn)芻(chú)獸(shòu)RT-PCR檢測(cè)試劑(jì)盒其中引物與(yǔ)模(mó)板的(dí)正(zhèng)確結合是關(guān)鍵。引物與模(mó)板的結(jié)合及引物(wù)鏈(liàn)的(dí)延伸是遵循(xún)鹼基配(pèi)對(duì)原則(zé)的(dí)。聚(jù)合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚(jù)合酶(méi)耐(nài)高溫性,使(shǐ)反(fǎn)應中模板與(yǔ)引物的(dí)結合(復性)可(kě)以(yǐ)在(zài)較高(gāo)的(dí)溫度(dù)下進行,結(jié)合的(dí)特異性(xìng)大大(dà)增加(jiā),被擴(kuò)增(zēng)的靶基因片段(duàn)也(yě)就能保持很(hěn)高的正(zhèng)確(què)度(dù)。再(zài)通(tōng)過選(xuǎn)擇(zé)特異(yì)性和保守性高(gāo)的靶基(jī)因區,其特異性(xìng)程度就更(gēng)高(gāo)。
(2) 靈敏度高(gāo)
PCR產(chǎn)物(wù)的(dí)生(shēng)成(chéng)量(liáng)是(shì)以指(zhǐ)數(shù)方式(shì)增加的,能(néng)將皮克(pg=10-12g)量級的(dí)起(qǐ)始(shǐ)待測模(mó)板(bǎn)擴增到(dào)微克(kè)(ug=10-6g)水平。能(néng)從100萬(wàn)個細胞(bāo)中(zhōng)檢出一(yī)個靶細(xì)胞(bāo);在病毒(dú)的(dí)檢(jiǎn)測中(zhōng),PCR的(dí)靈(líng)敏度(dù)可達(dá)3個RFU(空斑(bān)形成單位(wèi));在細菌學中(zhōng)zui小檢出(chū)率(shuài)為3個細(xì)菌。
(3) 簡便(biàn),快速
PCR反應(yīng)用(yòng)耐高溫的Taq DNA聚合(hé)酶,一次性地(dì)將反(fǎn)應(yīng)液加好後,即在DNA擴增(zēng)液和水浴(yù)鍋上(shàng)進(jìn)行變性(xìng)-退火(huǒ)-延(yán)伸反(fǎn)應,一(yī)般(bān)在2~4 小(xiǎo)時(shí)完成擴增反(fǎn)應。擴(kuò)增產物(wù)一(yī)般(bān)用(yòng)電泳(yǒng)分析,不一(yī)定(dìng)要(yào)用同(tóng)位素(sù),無(wú)放射性(xìng)汙(wū)染,易推(tuī)廣。
(4) 對標本的(dí)純度要求(qiú)低
不需(xū)要分離病(bìng)毒或細菌及培(péi)養細胞,DNA 粗製品及(jí)總RNA均可(kě)作(zuò)為擴增(zēng)模板(bǎn)。可(kě)直接(jiē)用臨(lín)床標本如血液,體腔液,洗(xǐ)嗽液,毛(máo)發(fā),細胞(bāo),活PCR技(jì)術概論(lùn)。
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