產品(pǐn)中(zhōng)心
PCR檢測試(shì)劑盒(hé)
商(shāng)品屬性
| 產品(pǐn)名稱(chēng) | 規格 | 貨號 |
|
豬內源性(xìng)逆(nì)轉(zhuǎn)錄病毒PCR檢測試(shì)劑盒 |
50T |
YS-P015348 |
儲存(cún)條件(jiàn)：-20℃避(bì)光保(bǎo)存(cún)，避(bì)免(miǎn)反復凍融(róng)。
運輸(shū)：低(dī)溫，避(bì)光(guāng)。
有效期(qī)：一(yī)年(nián)
貨期(qī)：現(xiàn)貨(huò)PCR試(shì)劑盒的有(yǒu)效(xiào)期一般(bān)為1年，這是指在(zài)適當的儲(chǔ)存(cún)溫度下。核酸擴增(zēng)部分(fēn)的試(shì)劑(jì)一般要貯(zhù)存於(yú)-20℃下，產(chǎn)物檢(jiǎn)測部分試劑則貯(zhù)存(cún)於(yú)2-8℃。盡(jìn)量避免反(fǎn)復(fù)凍(dòng)融(róng)。
【結果分析條件(jiàn)設定(dìng)】
u 閾值(Threshold)設(shè)定：將(jiāng)閾(yù)值(zhí)綫(xiàn)設(shè)定在剛好(hǎo)超過正(zhèng)常陰性(xìng)質控(kòng)品擴增曲(qū)綫的(dí)最(zuì)高(gāo)點。
【質控標(biāo)準(zhǔn)】
2. 陽性質控品的檢(jiǎn)測結果應(yīng)為陽性(xìng)，有明顯(xiǎn)的指數擴(kuò)增期，Ct值應小於等於35；
3. 以(yǐ)上(shàng)要(yào)求需(xū)在(zài)一(yī)次(cì)實驗中同(tóng)時滿(mǎn)足，否則(zé)該(gāi)次(cì)實(shí)驗視(shì)為無效(xiào)。
【結(jié)果(guǒ)判斷(duàn)】
2.可(kě)疑(yí)：有明顯的指(zhǐ)數(shù)擴增期，且(qiě)38≤Ct<40，此時樣本為(wéi)可疑樣本(běn)；對於可(kě)疑樣本建(jiàn)議復核一次，若(ruò)復核結果(guǒ)Ct<40且有指數擴增期，則(zé)判定為陽性(xìng)，否(fǒu)則(zé)判定為(wéi)陰性(xìng)；
3. 陰(yīn)性：無指(zhǐ)數(shù)擴增期，Ct=40或無Ct值均(jūn)判定為陰(yīn)性樣本(běn)。
【對(duì)檢驗結(jié)果的解(jiě)釋】
1. 實(shí)驗(yàn)室環境汙(wū)染，試劑汙(wū)染(rǎn)，樣(yàng)品(pǐn)交叉(chā)汙(wū)染會(huì)出(chū)現(xiàn)假(jiǎ)陽性結果(guǒ)；
2. 試劑運輸，保存不當或(huò)試(shì)劑配製(zhì)不準確(què)引(yǐn)起(qǐ)的試(shì)劑(jì)檢(jiǎn)測效能(néng)下降，可能會導(dǎo)致出現假陰(yīn)性(xìng)結(jié)果(guǒ)。
PCR反(fǎn)應的(dí)特(tè)異性：
②鹼(jiǎn)基配對原(yuán)則(zé)；
③Taq DNA聚合(hé)酶合成(chéng)反(fǎn)應的忠實性(xìng)；
④靶基(jī)因的(dí)特異(yì)性與保守性(xìng)。
豬內(nèi)源性逆轉錄病(bìng)毒PCR檢(jiǎn)測試劑(jì)盒(hé)其(qí)中(zhōng)引(yǐn)物與模(mó)板(bǎn)的正確(què)結(jié)合(hé)是(shì)關(guān)鍵。引物與模板的結合及引物鏈的(dí)延(yán)伸是(shì)遵循鹼(jiǎn)基配(pèi)對原則的(dí)。聚(jù)合(hé)酶(méi)合成(chéng)反應的(dí)忠(zhōng)實性及Taq DNA聚合酶耐(nài)高(gāo)溫性(xìng)，使(shǐ)反(fǎn)應中模板與(yǔ)引(yǐn)物(wù)的結合(hé)(復(fù)性)可以(yǐ)在較(jiào)高(gāo)的溫度(dù)下進行，結(jié)合的(dí)特(tè)異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基(jī)因(yīn)片段也就(jiù)能保(bǎo)持(chí)很(hěn)高(gāo)的(dí)正(zhèng)確(què)度。再(zài)通過選擇(zé)特異性和保守(shǒu)性(xìng)高的靶基因區(qū)，其(qí)特(tè)異(yì)性程度就(jiù)更高。
(2) 靈敏(mǐn)度(dù)高(gāo)
PCR產(chǎn)物的生成量是(shì)以指(zhǐ)數(shù)方式增加(jiā)的，能(néng)將皮克(kè)(pg=10-12g)量級(jí)的起始(shǐ)待測模(mó)板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞(bāo)中(zhōng)檢出一個靶(bǎ)細(xì)胞(bāo)；在(zài)病毒的(dí)檢測中(zhōng)，PCR的靈(líng)敏(mǐn)度可達3個RFU(空斑(bān)形(xíng)成單(dān)位(wèi))；在細菌學中zui小(xiǎo)檢出率(shuài)為3個細菌(jūn)。
(3) 簡(jiǎn)便，快速(sù)
PCR反(fǎn)應用(yòng)耐高(gāo)溫(wēn)的(dí)Taq DNA聚合(hé)酶(méi)，一(yī)次(cì)性(xìng)地將反(fǎn)應液加好(hǎo)後(hòu)，即在DNA擴增液和水浴鍋上(shàng)進(jìn)行變性-退火(huǒ)-延伸反(fǎn)應，一般(bān)在2～4 小時(shí)完(wán)成(chéng)擴增反(fǎn)應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般(bān)用電泳分析，不一定(dìng)要(yào)用同位素(sù)，無(wú)放射性(xìng)汙(wū)染(rǎn)，易(yì)推(tuī)廣。
(4) 對標本的(dí)純(chún)度要(yào)求(qiú)低
不需要(yào)分離病毒(dú)或細(xì)菌(jūn)及培養(yǎng)細(xì)胞(bāo)，DNA 粗製品及(jí)總RNA均可作(zuò)為擴(kuò)增(zēng)模(mó)板。可(kě)直接(jiē)用臨床標(biāo)本(běn)如血液(yè)，體腔液(yè)，洗嗽(sòu)液(yè)，毛(máo)發，細胞，活PCR技(jì)術(shù)概(gài)論(lùn)。
