耶氏肺孢子蟲(chóng)PCR進口(kǒu)試(shì)劑(jì)盒使(shǐ)用(yòng)方法：
測(cè)定(dìng)法(fǎ)的(dí)靈(líng)敏(mǐn)度來自(zì)作為報告(gào)的酶。酶(méi)是(shì)一(yī)種(zhǒng)有機催化(huà)劑(jì)，很少量的(dí)酶即可(kě)誘導(dǎo)大(dà)量(liáng)的催(cuī)化反應，產生(shēng)可供(gōng)觀(guān)察(chá)的顯色(sè)反應現象。因(yīn)此該(gāi)體(tǐ)係(xì)常被(bèi)稱為酶(méi)放(fàng)大體係。
1. 標準品的稀釋(shì)：本試劑盒提供原(yuán)倍(bèi)標準品(pǐn)一支(zhī)，用戶(hù)可按照(zhào)下(xià)列圖(tú)表在小試管(guǎn)中(zhōng)進行稀釋。   24μg/ml    5號標(biāo)準品    150μl的(dí)原倍(bèi)標準品加入(rù)150μl標準(zhǔn)品(pǐn)稀釋(shì)液
 12μg/ml    4號(hào)標準(zhǔn)品    150μl的(dí)5號標準品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(yè)
 6μg/ml     3號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的(dí)4號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入(rù)150μl標(biāo)準品稀釋液
 3μg/ml     2號(hào)標準品(pǐn)    150μl的(dí)3號標準品加(jiā)入150μl標(biāo)準品稀釋(shì)液
 1.5μg/ml   1號(hào)標準品    150μl的(dí)2號標(biāo)準(zhǔn)品(pǐn)加(jiā)入150μl標準(zhǔn)品稀釋(shì)液
2. 加樣(yàng)：分別設空白孔，標(biāo)準(zhǔn)孔(kǒng)，待(dài)測(cè)樣(yàng)品孔(kǒng)。在(zài)酶(méi)標包被(bèi)板上標準品準確加樣(yàng)50μl，待測(cè)樣品(pǐn)孔(kǒng)中先加樣品(pǐn)稀釋(shì)液40μl，然後再(zài)加待(dài)測樣品10μl（樣(yàng)品(pǐn)終稀釋度(dù)為(wéi)5倍）。加樣將(jiāng)樣品加(jiā)於(yú)酶(méi)標(biāo)板(bǎn)孔(kǒng)底部，盡量(liáng)不觸及孔壁，輕輕(qīng)晃(huǎng)動混(hùn)匀。|
3. 溫(wēn)育：用(yòng)封(fēng)板膜封板(bǎn)後(hòu)置37℃溫育(yù)30分鐘。   
4. 配(pèi)液：將(jiāng)30倍(bèi)濃縮洗(xǐ)滌液(yè)用蒸(zhēng)餾(liù)水30倍稀(xī)釋後備用
5. 洗(xǐ)滌(dí)：小(xiǎo)心揭掉封板膜，棄(qì)去液(yè)體(tǐ)，甩(shuǎi)幹(gān)，每孔加(jiā)滿(mǎn)洗滌液，靜(jìng)置(zhì)30秒(miǎo)後棄(qì)去，如此重復5次，拍(pāi)幹(gān)。
6. 加酶：每孔(kǒng)加入(rù)酶標(biāo)試劑50μl，空(kōng)白孔(kǒng)除外。
7. 溫育：操(cāo)作(zuò)同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯(xiǎn)色：每孔先加入顯色劑A50μl，再(zài)加(jiā)入顯(xiǎn)色(sè)劑(jì)B50μl，輕(qīng)輕震蕩混(hùn)匀(yún)，37℃避光(guāng)顯(xiǎn)色(sè)15分鐘.
10. 終止(zhǐ)：每孔加終止液50μl，終止(zhǐ)反應（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色(sè)）。
11. 測定(dìng)：以(yǐ)空白空調零，450nm波(bō)長依(yī)序(xù)測量各孔的吸(xī)光(guāng)度(dù)（OD值）。 測定應(yīng)在加(jiā)終(zhōng)止(zhǐ)液後15分鐘(zhōng)以內(nèi)進行(háng)。