霍亂弧(hú)菌O139型核酸檢測試劑盒操作(zuò)步驟
1．在冰浴中，按以下(xià)次序將各成分加(jiā)入一無菌(jūn)0.5ml離心管中(zhōng)。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶(méi)（2U/μl）            1μl
      DNA模板(bǎn)（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至(zhì)               50 μl
   視(shì)PCR儀(yí)有(yǒu)無熱蓋，不(bù)加或添加石蠟油。
2．調(tiáo)整好(hǎo)反(fǎn)應(yīng)程序。將(jiāng)上述混(hùn)合(hé)液稍加離(lí)心(xīn)，立即(jí)置PCR儀上，執行(háng)擴增。一般(bān)：在(zài)93℃預變性3-5min，進入循(xún)環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，後在72℃ 保溫(wēn)7min。
3．結束反應，PCR產物(wù)放(fàng)置(zhì)於(yú)4℃待電泳檢測或(huò)-20℃長期保存(cún)。
4．PCR的電泳檢(jiǎn)測：如(rú)在(zài)反(fǎn)應管中(zhōng)加有(yǒu)石蠟(là)油(yóu)，需(xū)用100μlLuFang進(jìn)行抽提(tí)反應混合液，以除(chú)去石(shí)蠟油；否(fǒu)則，直(zhí)接(jiē)取(qǔ)5-10μl電泳(yǒng)檢(jiǎn)測
霍(huò)亂(luàn)弧菌O139型核酸檢測試(shì)劑(jì)盒(hé)注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒(méi)有(yǒu)DNA汙染的幹淨(jìng)環境中進行。好設立一個的(dí)PCR實驗(yàn)室。
２．純化模板所(suǒ)選用的方(fāng)法(fǎ)對汙染(rǎn)的風(fēng)險(xiǎn)有(yǒu)影響(xiǎng)。一般(bān)而言(yán)，隻要能夠得到(dào)可(kě)靠(kào)的(dí)結(jié)果，純化(huà)的方法(fǎ)越(yuè)簡(jiǎn)單(dān)越好(hǎo)。
３．所有試(shì)劑都應該沒有核酸和核酸(suān)酶(méi)的(dí)汙染(rǎn)。操作過程中均(jūn)應戴手套。