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技術(shù)文獻

應如(rú)何(hé)快速消除ELISA幹(gān)擾?

文字(zì):[大(dà)][中][小(xiǎo)] 2025-8-12    瀏(liú)覽次數(shù):681    
     有(yǒu)稀釋(shì)標本(běn),改(gǎi)變(biàn)酶標抗體(tǐ),標(biāo)本(běn)中(zhōng)RF用(yòng)變(biàn)性IgG預(yù)先封閉,測定(dìng)抗原時加(jiā)入(rù)還原(yuán)劑(jì),包(bāo)被或(huò)酶(méi)標二抗使用特異的(dí)雞(jī)抗(kàng)體IgY,對(duì)臨(lín)床血清標本加(jiā)熱滅(miè)活(huó)補體,使用特異(yì)的兔F(ab’)2片段作為(wéi)固相(xiāng)或測定酶標(biāo)抗體(tǐ),在(zài)標本或(huò)標本(běn)稀釋液(yè)中加入(rù)過量(liáng)的動物(wù)Ig,使用(yòng)靶特異(yì)的(dí)非Ig親和(hé)蛋白替(tì)代固相或酶標抗體之一(yī)等(děng)方法。
稀釋(shì)標(biāo)本(běn)
     在(zài)測定前(qián)對標本(běn)進行(háng)稀(xī)釋(shì),特異的IgM因高(gāo)滴度存在仍(réng)可(kě)檢出,而(ér)非(fēi)特異的RF則會(huì)因為稀釋(shì)變成非常(cháng)低的滴度(dù),從而 對測(cè)定幾乎不(bù)產生幹擾。

改(gǎi)變(biàn)酶標(biāo)抗體(tǐ)
    將(jiāng)待酶(méi)標(biāo)的(dí)抗(kàng)體的F片(piàn)段(duàn)酶切夫除,僅留(liú)下具有特(tè)異結合功能的F(ab’)2部分標記酶,則在測(cè)定(dìng)中即可(kě)避(bì)免RF的(dí)幹擾。

標(biāo)本(běn)中(zhōng)RF用(yòng)變性(xìng)IgG預(yù)先(xiān)封(fēng)閉
   將經熱變(biàn)性(63℃,10min)的動物如兔(tù),羊等的IgG加入到標本(běn)稀釋液中,或(huò)是(shì)將該(gāi)變(biàn)性IgG連接至(zhì)一(yī)顆粒(lì)固(gù)相(xiāng)如聚(jù)苯乙烯(xī)微(wēi)球(qiú)或微(wēi)孔(kǒng),然(rán)後加入(rù)臨床血(xiě)清(qīng)標本,反(fǎn)應後,再吸(xī)出標本(běn)進行檢(jiǎn)測(cè)2。

測定抗(kàng)原時加入(rù)還(huán)原劑
    在標本(běn)中(zhōng)加入(rù)可使RF降解的(dí)還(huán)原(yuán)劑,如2—巰基乙醇(chún)。2—巰基乙(yǐ)醇等還(huán)原(yuán)劑(jì)可使抗(kàng)體內的(dí)巰基裂解,因(yīn)而(ér)可(kě)以去除(chú)RF的幹(gān)擾,但(dàn)隻適(shì)用於抗(kàng)原測(cè)定(dìng)。

包(bāo)被或酶標二抗(kàng)使(shǐ)用特(tè)異的(dí)雞(jī)抗體IgY
    RF不與雞(jī)IgY反應,如(rú)果(guǒ)包被和酶(méi)標二(èr)抗均(jūn)為雞IgY抗體(tǐ),則不(bù)受(shòu)標本(běn)中(zhōng)RF的幹(gān)擾2。

對臨床(chuáng)血(xiě)清標本加熱滅活補(bǔ)體
   采用56℃30min加熱(rè)可使標(biāo)本中的補體(tǐ)C1滅(miè)活。

使(shǐ)用特(tè)異(yì)的兔(tù)F(ab’)2片段(duàn)作為(wéi)固相或測定酶標(biāo)抗體
    異(yì)嗜性抗體(tǐ)可(kě)通(tōng)過交(jiāo)聯固相和(hé)酶標的單(dān)抗或(huò)多(duō)抗而(ér)出(chū)現(xiàn)假陽性(xìng)反(fǎn)應(yīng)。使(shǐ)用特異(yì)的兔(tù)F(ab’)2片段(duàn)作(zuò)為固相(xiāng)或(huò)測定(dìng)酶標(biāo)抗(kàng)體(tǐ)可以避免(miǎn)這(zhè)種幹擾。

在標本或(huò)標本稀(xī)釋液中(zhōng)加入(rù)過(guò)量的(dí)動物(wù)Ig
封(fēng)閉可能存(cún)在的(dí)異嗜性(xìng)抗(kàng)體,從而避(bì)免(miǎn)其(qí)幹擾(rǎo)。

使用(yòng)靶(bǎ)特(tè)異(yì)的(dí)非(fēi)Ig親和蛋白替(tì)代(dài)固相(xiāng)或(huò)酶(méi)標抗體(tǐ)之一
這(zhè)種方法可(kě)以(yǐ)避免(miǎn)異嗜性(xìng)抗體(tǐ)的(dí)幹擾。

以(yǐ)上方(fāng)法可以幫(bāng)助快速(sù)消除ELISA幹擾(rǎo)。在實(shí)際(jì)操(cāo)作中,可以根據具(jù)體情(qíng)況(kuàng)選(xuǎn)擇合適的方法或(huò)組合(hé)使用(yòng)多(duō)種(zhǒng)方法(fǎ)。
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