產(chǎn)品中(zhōng)心
PCR檢(jiǎn)測(cè)試劑盒
商品(pǐn)屬性(xìng)
| 產(chǎn)品名稱 | 英文(wén)名稱(chēng) | 貨號(hào) |
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鉤端螺(luó)旋(xuán)體(tǐ)通(tōng)用(yòng)PCR檢(jiǎn)測試劑盒 |
Leptospira spp.PCR |
YS-P014374 |
分類：PCR檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑盒
儲存(cún)條件(jiàn)：-20℃避光保(bǎo)存(cún)，避(bì)免(miǎn)反(fǎn)復凍融。
運(yùn)輸：低(dī)溫，避光(guāng)。
有效(xiào)期：一年
貨期(qī)：現(xiàn)貨PCR試劑盒(hé)的(dí)有(yǒu)效(xiào)期一般為(wéi)1年，這(zhè)是指在適(shì)當的(dí)儲存溫度(dù)下。核(hé)酸(suān)擴(kuò)增部分的試(shì)劑一般(bān)要(yào)貯(zhù)存於(yú)-20℃下，產物(wù)檢測(cè)部分試劑(jì)則(zé)貯存(cún)於2-8℃。盡量(liáng)避(bì)免(miǎn)反復凍融(róng)。
【結(jié)果分(fēn)析(xī)條件設(shè)定(dìng)】
u 閾值(Threshold)設定：將閾值綫設定在(zài)剛好(hǎo)超(chāo)過(guò)正常(cháng)陰(yīn)性質控品擴(kuò)增曲綫(xiàn)的最(zuì)高點。
【質控標(biāo)準】
2. 陽性質控品的(dí)檢測結(jié)果應(yīng)為(wéi)陽(yáng)性(xìng)，有(yǒu)明顯的(dí)指數(shù)擴(kuò)增(zēng)期(qī)，Ct值應小於等於(yú)35；
3. 以上(shàng)要求需在(zài)一(yī)次(cì)實驗(yàn)中同(tóng)時滿(mǎn)足，否(fǒu)則該次實驗(yàn)視(shì)為(wéi)無(wú)效(xiào)。
【結果判斷(duàn)】
2.可疑：有明(míng)顯(xiǎn)的(dí)指數擴增(zēng)期，且38≤Ct<40，此時(shí)樣本為可疑(yí)樣本(běn)；對(duì)於可(kě)疑樣(yàng)本建議(yì)復(fù)核一次(cì)，若(ruò)復核(hé)結果Ct<40且(qiě)有指數擴增(zēng)期，則(zé)判(pàn)定(dìng)為陽(yáng)性(xìng)，否則判定(dìng)為陰(yīn)性(xìng)；
3. 陰性：無指數擴(kuò)增期(qī)，Ct=40或(huò)無(wú)Ct值(zhí)均判定為陰性(xìng)樣(yàng)本。
【對(duì)檢驗結果的(dí)解釋】
1. 實驗(yàn)室(shì)環境(jìng)汙(wū)染，試(shì)劑汙(wū)染(rǎn)，樣品(pǐn)交叉汙染會(huì)出現假陽(yáng)性(xìng)結(jié)果；
2. 試劑(jì)運(yùn)輸，保(bǎo)存(cún)不當(dāng)或試劑配製(zhì)不(bù)準(zhǔn)確引起的(dí)試劑(jì)檢(jiǎn)測(cè)效(xiào)能下降，可能會導致出現(xiàn)假陰(yīn)性結果(guǒ)。
PCR反(fǎn)應(yīng)的特異性(xìng)：
②鹼基配對原(yuán)則；
③Taq DNA聚合(hé)酶合(hé)成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特(tè)異(yì)性與(yǔ)保守性。
鉤端螺旋體通(tōng)用PCR檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑盒其(qí)中引物與模(mó)板的正確(què)結(jié)合是關鍵。引(yǐn)物(wù)與模板(bǎn)的結合(hé)及(jí)引物(wù)鏈的(dí)延伸是遵(zūn)循鹼基(jī)配(pèi)對原則的。聚合(hé)酶合(hé)成反(fǎn)應的(dí)忠實性(xìng)及(jí)Taq DNA聚(jù)合酶耐高(gāo)溫性(xìng)，使反應中(zhōng)模板與引物(wù)的(dí)結合(復性(xìng))可以在(zài)較高的(dí)溫度(dù)下進(jìn)行，結合的特異(yì)性(xìng)大(dà)大增(zēng)加(jiā)，被擴(kuò)增的靶基因(yīn)片段也就能保持很高(gāo)的正(zhèng)確度。再(zài)通(tōng)過(guò)選(xuǎn)擇(zé)特異性(xìng)和保守性高(gāo)的(dí)靶基(jī)因區，其(qí)特(tè)異(yì)性程(chéng)度就更高。
(2) 靈敏(mǐn)度(dù)高
PCR產物(wù)的(dí)生成(chéng)量(liáng)是以(yǐ)指數(shù)方式(shì)增(zēng)加的，能(néng)將(jiāng)皮克(pg=10-12g)量級的起始(shǐ)待(dài)測模(mó)板(bǎn)擴增(zēng)到微(wēi)克(ug=10-6g)水平。能從(cóng)100萬(wàn)個細(xì)胞中檢出(chū)一個靶(bǎ)細胞；在(zài)病毒的檢測(cè)中，PCR的(dí)靈(líng)敏(mǐn)度(dù)可達(dá)3個RFU(空斑形(xíng)成(chéng)單(dān)位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌(jūn)。
(3) 簡便，快速(sù)
PCR反應用(yòng)耐高溫的Taq DNA聚合(hé)酶(méi)，一次(cì)性地將反(fǎn)應(yīng)液加好(hǎo)後(hòu)，即(jí)在(zài)DNA擴(kuò)增液(yè)和(hé)水(shuǐ)浴(yù)鍋(guō)上進行變(biàn)性-退(tuì)火(huǒ)-延(yán)伸反應，一般(bān)在2～4 小時(shí)完成擴增(zēng)反應(yīng)。擴增(zēng)產(chǎn)物(wù)一(yī)般用電泳分析(xī)，不(bù)一定要用同位素，無放射性汙(wū)染，易(yì)推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純(chún)度要(yào)求(qiú)低(dī)
不(bù)需(xū)要(yào)分(fēn)離(lí)病毒或(huò)細菌及培(péi)養細(xì)胞(bāo)，DNA 粗(cū)製品(pǐn)及總RNA均可作(zuò)為(wéi)擴增(zēng)模板。可(kě)直接(jiē)用臨床(chuáng)標(biāo)本如血(xiě)液，體(tǐ)腔液，洗(xǐ)嗽(sòu)液，毛(máo)發，細(xì)胞(bāo)，活PCR技術(shù)概論(lùn)。
